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Biosafety Laboratory Guidance for Handling and Processing Mpox Specimens
须知
- 所有临床标本都可能含有潜在的传染性病原体或微生物。
- 处理疑似或确诊猴痘病毒阳性的标本时要采取预防措施。
- 在处理和检测疑似 mpox 患者的样本时，临床和实验室工作人员之间的及时沟通对于最大限度地降低实验室传播风险至关重要。
- 相应地标记标本并提醒接收实验室，以确保标本得到适当处理。在运输过程中正确处理和储存标本对于准确的诊断检测至关重要。
一般指南
通知
猴痘病毒是痘病毒科正痘病毒属的成员。一些联邦法规和指南适用于与猴痘病毒相关的工作。请参阅 Select Agent Regulations。
根据免疫实践咨询委员会 （ACIP） 的建议，雇主应为有职业暴露风险的员工提供暴露前正痘病毒疫苗接种。两种疫苗可用于预防 mpox 病，即 JYNNEOS 和 ACAM2000。个人在接种第二剂 JYNNEOS 疫苗后 14 天或接种ACAM2000疫苗后四 （4） 周被视为完全接种疫苗。微生物和生物医学实验室生物安全 （BMBL） 第 6 版建议直接接触病毒培养物或被具有复制能力的正痘病毒（例如猴痘病毒）污染或感染的动物的实验室人员接种疫苗。BMBL 和 ACIP 建议，对于有毒性复制正痘病毒（例如猴痘病毒）职业风险的人，每 2 年接种一次 JYNNEOS 加强剂，每 3 年接种 ACAM2000 剂。他们还建议对那些有感染低毒力正痘病毒（例如牛痘病毒和牛痘病毒）职业风险的人至少每 10 年接种一次加强剂。
与所有程序一样，实验室应进行特定于地点和活动的风险评估，以识别和降低风险。风险评估和缓解措施取决于以下因素：
- 执行的程序
- 流程和程序中涉及的危害
- 执行程序的人员的能力水平
- 实验室设备和设施
- 可用资源
- 执行程序的人员的疫苗接种状态
跟随血源性病原体 – 工人防止职业接触传染病的保护措施指南（OSHA），在处理临床标本时，所有这些标本都可能含有传染性病原体或微生物。这些建议包括手部卫生和特定的个人防护装备 （PPE），这些设备由接触血液、体液和传染性物质的可能性决定。个人防护装备，如实验室外套或防护服、手套、护目镜、呼吸防护装置和面罩，可以帮助保护皮肤和眼睛、鼻子和嘴巴的粘膜。避免可能产生传染性气溶胶的作。
有关详细信息，请参阅：
选择代理规定
鉴定为进化枝 I 猴痘病毒的标本作为选择剂 （SA） 受到监管。拥有、使用或转让此材料的实体必须遵守 HHS Select Agent and Toxin Regulations [《美国联邦法规》第 42 卷第 73 节].被鉴定为进化枝 II 猴痘病毒的标本被排除在 SA 法规之外。但是，如果使用了不能识别进化枝的通用 mpox 测试，则该材料作为选择剂进行监管，除非适用其他豁免或排除。
鉴定为正痘病毒或非天花正痘病毒的标本不是选择性试剂，因此不是受管制的材料。看南澳克 – 2022 |资源 |联邦精选代理人计划 （Federal Select Agent Program） （selectagents.gov）了解更多关于2022年美国Mpox爆发和FSAP规定的信息。
如果您满足以下条件，则任何拥有诊断或验证样本或样品中所含 Select Agent 或毒素的 Select Agent 或毒素的人，均可免除 Select Agent 法规对该特定 Select Agent 或毒素的要求（更多详情请见此处：常见问题：特定试剂或毒素鉴定报告 |合规性 |联邦精选代理人计划 （Federal Select Agent Program） （selectagents.gov）:
- 除非联邦选择剂计划 （FSAP） 另有指示，否则在确定选择剂或毒素后七 （7） 个日历日内，根据选择剂法规第 16 节（需要事先获得 FSAP 批准）转让选择剂或毒素或销毁。
- 在转移或销毁之前，请保护选定的试剂或毒素，以防止被盗、丢失或释放。
- 根据法规中列出的报告标准报告所选试剂或毒素的鉴定结果（在使用通用 mpox 检测或 mpox 分支 I 鉴定出未确定的 mpox 分支后七 （7） 个日历日内）。
- 将所有 APHIS/CDC 表格 4A 报告的副本保留 （3） 三年。
选择代理销毁和停用选项
已确定的选择剂（使用通用 mpox 测定或 mpox 进化枝 I 无法确定的 mpox 分支）的销毁（例如通过消毒或灭菌）必须在现场进行，或根据选择剂法规第 16 节（需要事先获得 FSAP 批准）在 7 个日历日内进行转移。如果使用在制造商概述并经作员验证的允许参数内运行的高压灭菌器，则可以使用灭菌程序来灭活病毒。
有关识别特定试剂（包括进化枝 I MPXV）的非注册实验室的灭活信息，请参阅：https:/selectagents.gov/compliance/faq/inactivation.htm.一些裂解缓冲液（取决于缓冲液成分）也可能有效地使选择试剂变得不可行并满足排除标准（有关更多详细信息，请参阅相关出版物或电子邮件 poxviruslab@cdc.gov）。有关临床样本中鉴定的选定药物（包括进化枝 I MPXV）灭活的更多信息，请访问 https:/selectagents.gov/compliance/faq/inactivation.htm。
化学消毒程序可使用 EPA 注册的医院级消毒剂进行，并带有新出现的病毒病原体声明（请参阅下面的净化部分）。
诊断检测的生物安全注意事项
处理和检测 mpox 病变材料（包括病变表面和渗出物拭子以及病变结痂）的设施应配备必要的设备、工程控制、个人防护设备、适当的诊断检测和经过适当培训的人员。如果没有适当的安全设备或方案，请考虑将样本转诊至符合上述建议的配备齐全的参考实验室。
- 根据特定场地和活动特定的生物安全风险评估，按照 BSL-2 推荐的标准和特殊做法、安全设备和设施规格，在生物安全 2 级 （BSL-2） 实验室设施中进行常规诊断样本处理。降低接触风险的其他预防措施可能包括但不限于：
- 纯色前襟礼服，带翻边袖
- 双层手套
- 护目镜（安全眼镜、贴身护目镜）或面部防护装置（面罩）
- NIOSH 批准的颗粒物呼吸器，配备 N95 或更高过滤器
- 限制在样本作期间工作的实验室人员数量
- 带定向气流的实验室
- 在经过认证的 II 级生物安全柜 （BSC） 或其他密闭设备中作诊断标本，尤其是在有可能产生气溶胶的情况下（例如，在开管中对标本进行涡旋或超声处理）。请勿在工作台上使用敞口容器，除非根据现场和活动特定的风险评估（即，样本已使用经批准的灭活方法完全灭活）是安全的。
- 如果您无法在 BSC 中执行程序，请结合使用 PPE 和其他密闭设备（例如手套箱、离心机安全杯或密封转子），以便在样本和实验室人员之间建立屏障。执行特定于地点和活动的具体生物安全风险评估，以确定您的情况是否需要额外的生物安全预防措施。
常规诊断性检查
如果患者疑似或确诊患有猴痘病毒感染，则应在等待正痘病毒检测结果的同时继续进行检测以评估临床鉴别中的其他疾病。根据测试的样本实施特定的生物安全预防措施。
- 对于常规临床操作和非病变标本的检测，例如尿液分析用尿液、疑似或确诊 mpox 患者的血液分析用血液 [例如，全血细胞计数 （CBC）、生化检查、微生物学]：
- 根据特定场地和活动特定的生物安全风险评估，按照标准和特殊做法、安全设备和 BSL-2 推荐的设施规格，在生物安全 2 级 （BSL-2） 实验室设施中执行。有关其他常规诊断检测信息，请参阅 BMBL 附录 N – 临床实验室。
- 临床标本（如血液和体液）中的正痘病毒数量可能很低。采取标准的通用预防措施，以防止任何样本中的潜在传染源。始终遵守预防措施以防止传染性病原体传播 |第三节和保护实验室工作人员的生物安全规程将防止临床标本中可能接触猴痘病毒。限制检测样本的工作人员数量，并避免任何可能产生传染性气溶胶的程序。请参阅下面的预防指南，以防止接触极有可能产生气溶胶的程序。
- 对于疑似猴痘患者且同时接受正痘病毒和其他鉴别诊断的患者的病灶标本（包括病灶表面和渗出物的拭子以及病灶结痂）[例如，已知猴痘病毒含量最高的单纯疱疹病毒 （HSV） 或水痘-带状疱疹病毒 （VZV]）：
- 根据特定场地和活动特定的生物安全风险评估，遵循 BSL-2 的标准和特殊做法、安全设备和设施规格，在生物安全 2 级 （BSL-2） 实验室设施中执行。
- 在风险评估过程中，应评估额外的个人防护装备、缓解措施和做法，以降低暴露风险。请参阅检测的生物安全注意事项。
- 对于疑似 mpox 患者的病灶标本的病毒培养，用于猴痘病毒以外的诊断目的（例如 HSV 或 VZV）：
- 在 BSL-2 实验室设施中执行，根据实验室的特定地点和活动风险评估使用额外的预防措施来识别和降低风险。请参阅检测的生物安全注意事项。
- 如上所述，已知病变的猴痘病毒数量最高。一旦实验室工作人员使用经过验证的提取方案提取病毒 DNA，病毒 DNA 就不具有传染性。实验室人员可以按照标准和特殊做法、安全设备和针对 BSL-2 推荐的设施规格在BSL-2实验室设施中工作。如果可能，实验室工作人员应考虑使用提取 DNA 或 RNA 的诊断技术，而不是培养病变标本。请参阅微生物和生物医学实验室的生物安全 （BMBL），第 6 版，第 IV 节 – 实验室生物安全等级标准和第 VIII-E 节病毒制剂。
猴痘病毒标本培养
猴痘病毒的基于培养的检测不应作为临床或诊断实验室的常规诊断程序进行。请参阅微生物和生物医学实验室的生物安全 （BMBL），第 6 版，第 IV 节 – 实验室生物安全等级标准 BSL-3，以及第 VIII-E 节病毒制剂。如果实验室无意中培养了猴痘病毒，如果使用在制造商概述并经作员验证的允许参数内运行的高压灭菌器，则可以使用灭菌程序来灭活病毒。
细菌或真菌培养物的分子检测和分析
按照 BSL-2 推荐的标准和特殊做法、安全设备和设施规范，在 BSL-2 实验室设施中执行以下程序：
- 提取的核酸制剂的分子分析
- 用于诊断目的的细菌和真菌培养的常规检查
BSL-2 程序适用，除非病毒培养是在等待正痘病毒检测确认的病变标本上进行的。在对疑似猴痘患者进行病灶标本培养以用于诊断目的时，请参阅微生物和生物医学实验室的生物安全 （BMBL） 第 6 版，第 IV 节 – 实验室生物安全水平标准 BSL-3 和第 VIII-E 节病毒制剂。
临床和解剖病理学
病理学实践通过研究器官组织和体液在确定准确的疾病诊断方面起着关键作用。这包括细胞学的显微镜评估和测试、手术活检和尸检标本。
在处理可能患有未知或已知传染病或病毒（如猴痘病毒）的患者的新鲜组织和体液时，会出现与外科病理学和某些细胞学程序相关的风险。在手动标本处理、组织解剖和使用低温恒温器制备冷冻组织切片时，手术肉眼室的风险会增加。这些程序可能导致穿刺或割伤导致经皮暴露、血液和体液飞溅产生的飞沫或气溶胶暴露，以及被病毒污染的表面。临床实验室和支持人员必须了解这些风险并提供有效的缓解程序。
以下病理标本类型被视为灭活，可以按照 BSL-2 指南进行处理：
- 用于常规诊断染色和显微镜分析的固定液体或组织涂片
- 福尔马林固定活检或尸检组织
- 用于电子显微镜研究的戊二醛固定网格
应根据组织/活检大小在固定剂中使用足够的孵育时间，以允许足够的固定剂穿透。正痘病毒（如牛痘病毒和猴痘病毒）可能需要在固定剂中额外的潜伏时间。对于较大的组织样本，应利用额外的孵育时间以确保病毒完全灭活。
有关信息，请参阅：
解剖病理学使用与临床病理学不同的程序和工作流程，因此保护人员所需的风险和缓解控制可能有所不同。至少，所有从事解剖学或临床病理学工作的人员都应遵循 预防措施 防止传染性病原体的传播 |第 III 部分 处理临床标本时，包括手部卫生和使用个人防护装备时，例如实验室外套或防护服、手套、护目镜或一次性口罩和面罩，以帮助保护皮肤和眼睛、鼻子和嘴巴的粘膜。请参阅下面的预防指南，以防止接触下面的极有可能产生气溶胶的程序。
应进行针对特定地点和活动的具体生物安全风险评估，以确定是否需要采取额外的生物安全预防措施。
极有可能产生气溶胶的程序
实验室暴露于痘病毒主要通过针刺伤、直接接触标本或实验室程序可能产生的气溶胶发生。在经过认证的 II 类 BSC 中执行极有可能产生气溶胶（例如涡旋或超声处理）的程序。采取额外的预防措施，在样本和人员之间建立屏障。这些额外的预防措施可能包括离心机安全杯、密封的离心机转子和额外的 PPE，以降低接触实验室人员的风险。执行特定于场地和活动的生物安全风险评估，以识别和减轻风险，并确定您的情况是否需要额外的生物安全预防措施。可能需要额外生物安全预防措施的情况包括高检测量、使用气动管系统和自动化检测平台（例如实验室机器人平台等）。如果检测疑似 mpox 患者的病变标本，CDC 建议实验室人员在将标本放在任何自动平台上或将平台置于 II 类 BSC 内（如果有）之前进行完全病毒灭活。
如果实验室人员无法执行可能在 BSC 中产生气溶胶的程序，可接受的呼吸保护方法包括 NIOSH 批准的带有 N95 或更高过滤器的呼吸器。N95 过滤式呼吸器提供最低级别的呼吸保护。设施可以考虑使用更高级别的呼吸防护装置，尤其是在人员无法正确佩戴紧密贴合的呼吸器型号的情况下。这些更高的水平可能包括使用配备微粒过滤器的松散式 NIOSH 批准的动力空气净化呼吸器。
净化
使用 EPA 注册的医院级消毒剂执行常规清洁和消毒程序，并声称含有新出现的病毒病原体。带有新出现病毒病原体声明的商品可在EPA 的清单 Q.请遵循制造商的浓度、接触时间以及护理和处理说明。
重新评估当前的清洁、PPE 使用、患者安置和手部卫生方案;请参阅防止传染性病原体传播的预防措施 |第三部分。例如，患者候诊室和设备等高频接触表面在工作区域受到污染的可能性较高，应经常消毒。增加可用清洁用品的数量，将其分发到整个实验室和等候区，并鼓励工作人员经常清洁表面和设备。可重复使用的个人防护用品应按照制造商的说明进行清洁和消毒，因为并非所有消毒剂都兼容，有些消毒剂可能会降低个人防护用品的品质。
实验室废物管理
将尖锐物品丢弃在适当的防刺容器中，作为传染性废物进行高压灭菌。所有培养物、储备物、残留标本和猴痘病毒废物在现场处置前应使用经批准的方法（例如高压灭菌）进行净化。在实验室外进行净化的材料应放置在耐用、防漏的容器中，并密闭以便从实验室运输。遵守当地、地区、州、国家和国际废物处理法规。州和地方的废物处理法规各不相同;有关更多信息，请参阅：
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