利用聚合酶链反应技术诊断百日咳的最佳实践方法

概述

自 20 世纪 90 年代初以来，百日咳的病例数有所增加。因此，医疗工作者越来越有可能遇到更多疑似患有百日咳的病人。PCR 检测是及时诊断百日咳的重要手段，而且现在越来越多的医疗机构能够使用这种检测方法。

PCR 是一种用于检测百日咳杆菌 DNA 序列的分子生物学技术。与培养法不同，PCR 不需要样本中存在活的细菌。尽管有这些优点，PCR 检测结果仍可能出现假阴性和假阳性。

以下这些最佳实践的汇总，旨在为医疗服务提供者提供帮助：

• 优化百日咳的 PCR 检测使用方式
• 避免那些会导致结果不准确的常见错误。

对有相关症状和体征的患者进行检测

百日咳的早期症状往往不具特异性，因此在疾病初期很难通过临床判断患者是否患有百日咳。不过，只有那些出现与百日咳相符的症状的患者才需要进行 PCR 检测以确认诊断。应避免对无症状者进行检测，因为这可能导致假阳性结果。对于确诊病例的无症状接触者，无需进行检测；同时，也不应依据接触者的检测结果来决定是否需要采取暴露后预防措施。

进行 PCR 检测的最佳时机

在咳嗽开始的前三周内，由于鼻咽部仍存在细菌 DNA，PCR 检测的灵敏度最高。到了咳嗽的第四周之后，细菌 DNA 的数量会迅速减少，这就增加了检测结果呈阴性的风险。

在抗生素治疗之后进行 PCR 检测，也可能会出现假阴性的结果。抗生素使用后，阳性结果会持续多久，目前尚不清楚。不过，抗生素使用 5 天后再进行 PCR 检测，很可能没有任何意义，因此一般不推荐这种做法。

用于 PCR 检测的最佳样本采集方式

用于 PCR 检测的样本应通过抽吸或拭子采样的方式从鼻咽部后部获取。拭子的头部可以由聚酯纤维（如达克罗纶®）、人造丝或尼龙材料制成。如果条件允许，建议使用生理盐水冲洗鼻咽部后部再抽取样本，而非直接用拭子采样。这种方法能确保样本中包含更多的细菌 DNA。

咽拭子和鼻前部拭子的 DNA 提取率过低，无法满足诊断需求，因此不适用于百日咳的诊断。棉签或海藻酸钙拭子也不适合使用，因为这些材料上的残留物会干扰 PCR 检测结果。

避免因百日咳病毒 DNA 而导致的污染

研究发现，某些百日咳疫苗中含有可通过 PCR 检测到的百日咳杆菌 DNA。在临床环境中进行的检测也证实了这些疫苗中确实存在百日咳杆菌 DNA。不过，这些 DNA 的存在并不会影响疫苗的安全性或免疫效果。但是，如果这些 DNA 从环境表面意外转移到了临床样本中，就可能导致样本受到污染，从而产生错误的检测结果。

如果医疗服务提供者能够遵守良好的操作规范，那就没必要去寻找或使用那些不含有残留 DNA 的百日咳疫苗了。

在远离百日咳样本采集区域的地点来准备和接种疫苗，可以减少交叉污染的风险。在准备和接种百日咳疫苗时，必须格外小心，避免疫苗污染各种表面。只要严格遵守基本的感染控制措施，就能进一步防止样本受到污染。

在以下操作开始前和操作过程中必须佩戴手套，操作结束后则应立即丢弃手套：

• 样本采集
• 疫苗制备
• 疫苗接种

使用 10%的漂白剂来清洁诊所的各个表面，以减少诊所环境中的核酸含量。

避免因液体输送介质而导致的污染

使用液体运输介质也很可能导致检测结果出现假阳性。那些从手上不小心转移到拭子上的 DNA，可能会被冲入液体介质中。这种液体在运输管内循环流动，之后会被提取出来，用于 PCR 检测。

采用以下方法之一，有助于防止拭子杆上的污染物 DNA 进入后续需要提取的样本部分：

• 半固态或非液态的传输介质
• 无运输介质的干拭子

只需处理那些在插入培养基后，杆部断裂、位于标记线以上的拭子即可。

采用鼻咽抽吸法而非鼻咽拭子采样，也能有效避免污染。在样本采集过程中，抽吸装置（无论是注射器还是球囊式装置）都属于封闭式系统。

理解与解读测试结果

百日咳的 PCR 检测方法在各个临床实验室之间并不统一，具体表现为：

• 测试方法
• 所使用的 DNA 靶标
• 多种结果解读标准
• 在判定检测结果为阳性时，没有使用相同的标准。

在 PCR 检测中，较高的循环阈值（Ct 值）意味着被扩增的 DNA 含量较低。对于百日咳而言，虽然较高的 Ct 值可能表明存在感染，但也可能是因为在样本采集过程中，样本被环境中的 DNA 污染所致。临床实验室可能会将较高的 Ct 值报告为“阳性”、“检测到”、“结果不确定”或“结果不明确”等。

此外，大多数临床实验室在检测 IS481 时都只检测一个目标序列。该序列在百日咳杆菌中存在多个拷贝，而在其他博德特氏菌属的细菌中则存在较少。由于该 DNA 序列存在多个拷贝，因此 IS481 容易导致百日咳杆菌检测结果出现假阳性。如果同时检测多个目标序列，就能提高百日咳杆菌检测的准确性。

建议医疗服务提供者了解其实验室所使用的具体 PCR 检测靶标是什么。对于 PCR 检测结果的解释，尤其是那些 Ct 值较高的结果，应结合其他信息来综合判断。

• 对各种症状和体征的评估
• 现有的流行病学信息