减少犬的进口等待期-对狂犬病恐惧科学合理的变化

减少犬的进口等待期-对狂犬病恐惧科学合理的变化

Rabies importation in dogs and reduction of waiting period – The fear for scientifically justified changes

托马斯·穆勒

德国弗里德里希-雷夫勒研究所分子病毒学和细胞生物学研究所

德国WOAH狂犬病参考实验室

瑞安·华莱士

国家新发和人畜共患传染病中心疾病中心高后果病原体和病理学部门痘病毒和狂犬病分部

美国佐治亚州亚特兰大市控制与预防中心

美国WOAH狂犬病参考实验室

康拉德·弗罗林

德国弗里德里希-雷夫勒研究所分子病毒学和细胞生物学研究所

德国WOAH狂犬病参考实验室

狂犬病传入易感动物种群后，除了对再消灭造成重大经济影响外，还会对人类和动物健康造成严重影响[1,2]。在20世纪70年代末和80年代初，犬狂犬病病毒变种被重新引入美国南部，导致2人和500多只动物死亡，并在接下来的20年里花费了4000多万美元来消除这种疾病[3,4]。2015年，犬类狂犬病传入马来西亚沙捞越州[5]，在那里，它已导致30多人死亡，控制疫情的努力仍在进行中。显然，犬类狂犬病的传入不是小事，全球标准，如世界动物卫生组织（WOAH）的陆地动物健康准则[6]，以支持各国防止此类事件发生。目前感染狂犬病的犬输入北美和欧洲完全是由犬的非法流动造成的；也就是说，那些不遵守国家和国际运动要求的犬[7–9]。

WOAH目前对来自狂犬病病毒流行国家的犬的移动标准包括以下标准:犬在旅行时是健康的，正在接种狂犬病疫苗，被永久识别（如微芯片），具有足够的狂犬病病毒中和抗体（RVNA）滴度（定义为>0.5 IU/ml），并在采集足够的血清样本之日后等待至少90天（不超过365天），称为“等候期间” [6]。鉴于几乎所有现代狂犬病输入事件都与有意或无意不遵守WOAH等待期有关，一些同行评审的科学出版物重新审查了90天等待期的理由（表1），特别关注科学证据和减少长时间等待之间的比较，长时间等待可能会鼓励犬主人和进口商低估等待时间的要求[9–11]。与此相反，根据我们的经验，人们对90天的等待期越来越不满意，此外，欺诈性文件在当前系统中可能猖獗[12,13]。

为了理解等待期的合理性，我们必须回顾狂犬病病毒的病理生理学，并承认血清学试验的某些局限性。目前的黄金标准RVNA检测无法区分由主动感染导致的RVNA病毒生产与由疫苗接种导致的RVNA病毒生产[16]。因此，对适当的RVNA试验结果的解释必须包括对动物当前健康状况的评估和对血清采集后时间的考虑。狂犬病病毒是一种嗜神经病毒，因此它可以通过外周神经系统从接种部位转移到中枢神经系统（CNS），从而巧妙地避开免疫系统[17]。动物被感染的时间，但病毒在外周神经系统中，动物无症状，并且目前的测试无法检测病毒RNA、抗原或RVNA。只有在病毒到达中枢神经系统后，免疫系统才会识别出随后发展为狂犬病的动物体内的病毒，这可能需要暴露后数周至数月的时间（例如“潜伏期”）[17,18]。因此，在健康的接种过疫苗的动物中检测到RVNA几乎总是由于疫苗——然而，根据经验和在动物研究中发现了罕见的例外情况。鉴于狂犬病病毒的这些独特动力学和当前的诊断技术，我们必须能够表征三个关键的宿主疾病因素，因为它们与血清学试验有关:（1）动物发生感染诱导的RVNA的频率是多少？（2）在感染诱发的RVNA发生后，受狂犬病影响的动物保持无症状多长时间？（3）如果犬在接种疫苗前感染了RABV（A型风险），接种疫苗后多长时间仍会发生狂犬病？如果我们能够表征这三种宿主疾病因素，那么我们就可以准确地解释狂犬病血清学结果，并更好地了解当前的WOAH标准是否确实是基于证据的。

关于第一个问题，已经进行了几项关键研究来检查犬中狂犬病病毒的病理生理学。值得注意的是，这些研究清楚地表明，大多数（>90%）感染狂犬病病毒的犬在有机会在血清中产生可检测的RVNA反应之前就会死亡[19–21]，而只有极少数动物出现感染诱发的RVNA[20,22,23]。不足为奇的是，狂犬病病毒的病理学并非犬科动物特异性的，在临床人类狂犬病病毒病例中也报道了类似的低RVNA检测率，在这些病例中，直到出现严重临床症状后至少7天才常规检测血清RVNA[24,25]。当考虑这些发现对犬类进口标准的影响时，由于由于疾病（特别是在健康动物中）导致的RVNA发展相对罕见，因此几乎可以肯定，健康的、接种过疫苗的犬类中的RVNA是疫苗的结果。

关于第二个问题，实验数据清楚地表明，在犬出现病毒诱导的RVNA的相对罕见的情况下，动物要么很好地存活下来，要么在抗体检测的30天内死于感染[22,23,26]。虽然调查这种相关性的研究样本量相当有限，但WOAH公布了评估疫苗有效性的样本量指南对于接种疫苗的动物（如犬）的功效试验，应使用25只或更多动物作为疫苗接种者。”史密斯等人用53只犬来解决第二个问题；其中26只产生了RVNA并存活下来，18人产生了RVNA并死亡（均在发现RVNA病毒后13天内），9只从未产生RVNA并死于狂犬病病毒感染（图1)。欢迎对RVNA检测和狂犬病发展之间的关系进行更多研究，但这些研究费用高昂，并且需要对犬进行终端感染；当目前的实验和经验数据如此令人信服时，很难证明这两个问题的合理性。

关于第三个问题，虽然有限但意义重大，研究还探讨了在实验室和隔离环境下类似A型风险的暴露后预防（PEP）问题。数据是令人信服的——犬只有在按照在生物制剂和给药时间表方面相当于人类狂犬病PEP的方案进行治疗时，才能预防狂犬病。如果不遵循后者或只给予疫苗或免疫球蛋白，这些研究中所有死于狂犬病感染的犬在抗体检测后13天内死亡，RVNA检测后的平均死亡时间仅为7-8天[19,22,26]。类似地，在一个PEP计划期间，包括对初次暴露的家养动物立即接种疫苗并进行6个月的隔离，并在5个月后加强疫苗接种，在1979年至1999年期间，德克萨斯州有超过1000只疑似狂犬病暴露的未接种疫苗的犬接受了PEP。其中，6例感染狂犬病，在首次接种疫苗后11-23天出现临床症状或死亡；RVNA没有被评估。如果考虑到由于接种疫苗7天而引起的第一次免疫反应[27–30]，那么RVNA检测后的死亡时间应该更短，这与Smith等人的发现一致。[31,32]。同样，考虑到大量科学证据的影响，如果一只犬（1）已经接种了疫苗，（2）检测到足够的RVNA，（3）还活着，并且（4）在至少30天后（如果不是更早的话）是健康的，那么毫无疑问，它已经充分接种了狂犬病疫苗。鉴于我们对（a）狂犬病病毒，（b）疫苗接种的病理生理反应和（c）当前血清学检测的局限性之间关系的进一步了解，当前的WOAH犬类运动标准将支持低至30天血清后等候期间” (图1)。

2022年，WOAH狂犬病实验室专家网络审查了这一数据，一致认为90天的等待期合法进口的犬（符合WOAH标准）不再得到科学证据的支持，WOAH应考虑将等待期缩短为30天(图1)。

表1研究的关键信息和参数的比较研究符合国际标准，这些研究旨在调查缩短等待期对犬类狂犬病输入风险的影响。

研究	等待期定义	关于缩短等待期的结论	定量风险估计*	风险增加倍数	最高风险参数	参考
1	“……来自未列出的第三国的伴侣动物必须被识别、接种疫苗，血清学测试，并且在检测后必须在原产国完成三3个月的等待期。”	“……与这两种方案相关的绝对风险是极低.”	1.5×10−4	增长1.8倍	不遵守	[14]
2	“……三个月之间的充分证明狂犬病血清抗体滴度（≥0.5 IU/mL）并进入无狂犬病国家。”	“30天的等待期将确保可忽略的A型风险同时降低违规风险，这已被证明是进口疯犬的最大威胁。”	不是定量	不是定量	不遵守	[9]
3	“最短监管期:30天之前血清试验等待期为90天 血清学测试后。”**	“血清学检测后的等待期 被证明有一个对风险的影响可以忽略不计狂犬病的传播。”	2.8×10−2	“几乎没有影响”	不遵守	[10]
4	“从采血到进入无狂犬病国家的时间。“	“……有95%的把握得出结论，在20年内符合规定的感染狂犬病的进口犬的数量最多可从5只增加到20只，而等待时间从90天减少到30天。”	1.1×10-5	4倍增加	减少的 等待 时期	[15]
5	没有定义，但提到[1].	“事实上，根据建议的90天等待期和单一疫苗接种的政策修正案，狂犬病传入的风险仍然很低，只会增加4倍…	每个地区各不相同	4倍增加	不遵守	[11]

 

 

图1.与WOAH犬类进口标准拟议修正案相关的关键生物和程序事件[9]；第0天代表抗体检测日，并开始等待期。虚线代表基于53只犬的实验攻击的抗体（Ab）检测后的存活数据[19]。从抗体形成到死亡的平均时间为7天，范围为0-13天。

WOAH标准委员会审查了提出的证据并表示同意，并提议对2023年WOAH世界代表大会期间审议的《陆地守则》进行编辑。不幸的是，与科学证据和狂犬病专家的意见相反，该措施未获批准，等待期仍为血清转化证明后的90天。关于狂犬病血清抗体转化科学的分歧的一个明显基础来自欧洲食品安全局（EFSA）进行的风险分析，该分析得出结论认为，30天的缩短等待期将导致进口到欧盟的患狂犬病的犬的数量增加[15]。EFSA的分析提出了几个假设，这应该会引发人们对其评估有效性的担忧。虽然等待期定义与其他模型一致（表1），分析的主要组成部分似乎使用了不同的定义，这取决于潜伏期（从感染到死亡的时间，不考虑RVNA的发展）。EFSA的模型假设接种疫苗的犬在疫苗接种后21天内被认为完全没有受到保护，并指出潜伏期的长度被认为是本次评估的主要流行病学参数” [15]。因此，该分析考虑了从检测到足够的RVNA开始的潜伏期可能超过建议的等待期（30或90天）的可能性。这是一种过于简化的说法，有数据显示，犬在接种强效灭活狂犬病疫苗后7天就可以产生可检测到的滴度，并且在接种疫苗后21天之前就可以获得保护[27–30]。EFSA分析中的这种混乱是至关重要的，因为它导致了更长的风险持续时间，因为狂犬病的可变潜伏期导致病例在感染后长达180天或更长时间内发生，因此导致了对狂犬病输入风险的夸大解释[15,33]，并可能引发对缩短等候期的建议的毫无根据的担忧。有趣的是，与EFSA的报告相反，来自一个欧盟成员国的另一项科学同行审查研究最近得出结论，血清学检测要求对降低风险几乎没有影响，大部分风险来自欺诈和缺乏疫苗接种（表1) [10].

模型应该是在无法进行真实实验的情况下开发的[34]。幸运的是，为了了解狂犬病流行国家的犬类流动风险，有几十年的经验数据可以得出狂犬病犬类输入风险的结论:

在欧洲联盟，根据第577/2013号执行条例（欧盟），来自狂犬病流行国家的犬需要等待90天[35]，在过去的20年里，没有一只合法进口的患狂犬病犬。此外，还列出了一些狂犬病流行国家，这些国家不需要进行血清学测试，只需在过境前至少21天进行初次疫苗接种即可。但也没有一只从这些国家合法进口的患狂犬病的犬。这与EFSA的结果直接冲突[15]，这表明至少有5起案件。相反，在此期间，有36个非法地将患狂犬病的犬进口到欧盟[9] [https://www.wh o-rabies-bulletin.org/].简而言之，这些非法进口的犬要么没有接种疫苗和/或进行血清学测试，要么有欺诈性的文件。

美国的犬类进口率与欧盟相似高，但只要求接种疫苗后有30天的等待期（不要求提供效价证明）。从EFSA模式推断，在过去的二十年里，美国应该有>20合法进口的患狂犬病的犬；然而还没有。与欧盟类似，所有7只进口到美国的患狂犬病的狗都是非法入境，原因与上述原因相同[13,36–39].

此外，当前的乌克兰危机似乎明确否定了风险增加的假设。由于狂犬病情况，根据第577/2013号实施条例（欧盟），乌克兰被视为非清单国家[35]。由于战争，估计有480万乌克兰难民抵达欧盟和英国，其中许多人带着他们的宠物超文本传送协议（Hyper Text Transport Protocol的缩写） s://de.statista.com].为了解决这一危机，欧盟通过指令（欧盟）第2006/2007号的授权。576/2013[40]允许欧盟成员国授权在一定时期内不符合规定的宠物进入其领土进行非商业活动。假设5-10%的难民携带了猫犬，这相当于至少有240，000到480，000只猫犬在没有任何等待期的情况下被进口到欧盟，并且只有部分接受了疫苗接种和/或血清学测试。自2022年2月战争开始以来，没有一例输入性狂犬病病例是由这种情况造成的。

数学模型（表1）可以在如此强大的现实世界经验中得到验证，但不幸的是，最近的历史表明，EFSA报告中的风险估计被夸大了。现实世界的经验证据表明，在过去的20年里，有>40只患狂犬病的狗非法进口到美国和欧盟美国和欧盟[9,13,36–39,41]，只有一例导致二次传播[42,43]，在任何情况下，这些输入都没有导致国内有意义的传播。虽然最初只审查了犬的等待时间的减少，但有充分的理由相信这也适用于猫，即使没有如此详细的数据[10,11]，因为这些动物不是狂犬病的宿主，而且通过猫传播的事件很少发生[44]。目前，香港正在考虑缩短宠物猫和宠物犬为期四个月的进口检疫期[45].

在全球化的世界中，疾病传入的风险可以最小化，但永远无法消除。90天的等待期没有科学证据支持。很明显，90天的等待期对犬进口商造成了不适当的限制，这可能会导致违法的犬的运动[9-11]。虽然等待期的缩短不会显著增加狂犬病传入的风险，但李可利认为，由于更加遵守进口要求，总体风险实际上可能会降低[9-11]。遗憾的是，WOAH成员国没有采纳拟议的《陆生动物健康守则》，该守则允许各国在风险评估证明合理的情况下等待30天以上的时间，这一事实表明，感知风险有时大于科学证据[11]。

资金来源声明

作者声明，第三方没有为所报道的作品提供任何经济或非经济援助。

竞争利益声明

作者声明，他们没有已知的竞争财务利益或个人关系，这可能会影响本文中报告的工作。本文中表达的科学观点是作者的观点，可能不一定符合其机构的官方政策。

数据可用性

文章中描述的研究没有使用任何数据。

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